蛋白質提取試劑RIPA組織/細胞裂解液
貨號 ：R0020
規格 ：100ml
本產品配有一支 PMSF（100mM，1.5ml）
保存 ：RIPA 裂解液 4℃保存，PMSF -20℃保存。

產品簡介 ：

    RIPA 組織/細胞裂解液是利用表面活性劑等來裂解細胞膜（包括核膜） 。本試劑提取的蛋白為可溶性總蛋白。

使用說明 ：
    如發現 RIPA 有沉淀，請放室溫半小時或者常溫水浴使沉淀溶解。
    根據使用量， 取每 1ml RIPA 加入 10ul PMSF， 使 PMSF 的終濃度為 1mM， 混勻備用 （PMSF 現用現加） 。
1、樣品前處理：
   a)對于貼壁細胞：去除培養液，用 PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍。按照 6 孔板每孔細胞量加入150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。
   b)對于懸浮細胞：離心收集細胞，按照 6 孔板每孔細胞量加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液，用手指輕彈懸浮細胞以充分裂解。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成 5-10×10 5 細胞/管，然后再裂解。
   c)對于組織樣品：把組織剪切成細小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250ul 裂解液的比例加入裂解液(如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液，如果需要高濃度的蛋白樣品，可以適當減少裂解液的用量) 。用玻璃勻漿器勻漿，直充分裂解。
2、后處理：
   將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘， 取上清， 即可進行后續的蛋白濃度測定、 SDS-PAGE、 Western blotting 和免疫沉淀等操作。

注意事項 ：
     1、 使用本裂解液可以裂解細胞核，釋放出核蛋白的同時，也會將基因組一并釋放出來，造成細胞裂解液粘稠，此時可以直接加入蛋白上樣緩沖液煮沸再離心，離心后直接上樣電泳；若想測定濃度，可入加少量 SDS（1%） ，煮沸后離心測濃度。
     2、 本系列蛋白提取試劑所提取的蛋白由于含有去污劑，所以不適合使用 Bradford 蛋白濃度測定試劑盒，請選擇 BCA 法或者 Lowry 法檢測蛋白濃度。
     3、 如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散粘稠狀物，隨后離心取上清用于后續實驗。

相關產品 ：

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蛋白質提取試劑RIPA組織/細胞裂解液

 
參考文獻：
《Long noncoding RNA ENST00000413528 sponges microRNA‐593‐5p to modulate human glioma growth via polo‐like kinase 1》 作者:Ren Zhang, Ruo‐Lun Wei, Wei Du, Li‐Wei Zhang, Tao Du, Ya‐Dong Geng, Xin‐ting Wei 期刊:CNS Neuroscience & Therapeutics 影響因子:4.458 PMID:30924320
《Sphingomyelin synthase 2 promotes H2O2-induced endothelial dysfunction by activating the Wnt/β-catenin signaling pathway》 作者:Panpan Zhang,Lingyue Hua,Huan Hou, Xingyue Du,Zhiqiang He, Menghan Liu, Xiaojuan Hu, Nianlong Yan 期刊:International Journal of Molecular Medicine 影響因子:2.928 PMID:30272329
《Eicosapentaenoic acid-containing phosphatidylcholine promotes osteogenesis:mechanism of up-regulating Runx2 and ERK-mediated phosphorylation of PPARγ at serine 112》 作者:Lei Mao，Meiling Wang，Yuanyuan Li，Yaxuan Liu，Jingfeng Wang，Changhu Xue 期刊:Journal of Functional Foods 影響因子:3.197 PMID: