蛋白提取高效RIPA組織/細胞快速裂解液
貨號 ：R0010
規格 ：20ml/100ml
本產品配有一支 PMSF（0.3ml/1.5ml）
保存 ：RIPA 裂解液 4℃保存，PMSF-20 ℃保存。

使用說明：
    如發現 RIPA 有沉淀，請放室溫半小時或者常溫水浴使沉淀溶解。
    根據使用量， 取每 1ml RIPA 加入 10ul PMSF， 使 PMSF 的終濃度為 1mM。 混勻備用 （PMSF 現用現加）。
    1、樣品前處理：
    a)對于貼壁細胞：去除培養液，用 PBS、鹽水或無血清培養液洗一遍。按照 6 孔板每孔細胞量加入150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下，使裂解液和細胞充分接觸。
    b)對于懸浮細胞：離心收集細胞，用手指把細胞用力彈散。按照 6 孔板每孔細胞量加入 150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液，再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多，必需分裝成 50-100 萬細胞/管，然后再裂解。
   c)對于組織樣品： 把組織剪切成細小的碎片。按照每 20mg 組織加入 150-250 ul 裂解液的比例加入裂解液。 (如果裂解不充分可以適當添加更多的裂解液， 如果需要高濃度的蛋白樣品， 可以適當減少裂解液的用量)。
   用玻璃勻漿器勻漿，直充分裂解。
2、后處理：
   將裂解后的樣品 10000-14000g 離心 3-5 分鐘， 取上清， 即可進行后續的蛋白濃度測定、 SDS-PAGE、 Western blotting 和免疫沉淀等操作。

注意事項 ：
    本試劑為強烈型裂解液，可以提取核蛋白，但在提取核蛋白的同時，也會將基因組一并釋放出來，若細胞量多會造成細胞裂解液粘稠：此時可以直接加入蛋白上樣緩沖液，煮沸再離心，離心后直接上樣電泳；若想測定濃度，可入加少量 SDS（1%） ，煮沸后離心測濃度。本系列蛋白提取試劑所提取的蛋白由于含有去污劑，所以不適合使用 Bradford 蛋白濃度測定試劑盒，請選擇 BCA 法或者 Lowry 法檢測蛋白濃度。
    如果需要檢測和基因組結合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散粘稠狀物，隨后離心取上清用于后續實驗。

相關產品 ：
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參考文獻：
《Long noncoding RNA ENST00000413528 sponges microRNA‐593‐5p to modulate human glioma growth via polo‐like kinase 1》 作者:Ren Zhang, Ruo‐Lun Wei, Wei Du, Li‐Wei Zhang, Tao Du, Ya‐Dong Geng, Xin‐ting Wei 期刊:CNS Neuroscience & Therapeutics 影響因子:4.458 PMID:30924320
《Glutamine Enhances the Hypoglycemic Effect of Insulin in L6 Cells via Phosphatidylinositol-3-Kinase (PI3K)/Protein Kinase B (AKT)/Glucose Transporter 4 (GLUT4) Signaling Pathway》 作者:Caijuan Wang, Yujiao Deng, Yenan Yue, Wenting Chen, Yu Zhang, Guifang Shi, and Zhongming Wu 期刊:Medical Science Monitor 影響因子:1.98 PMID:29491345
《Sphingomyelin synthase 2 promotes H2O2-induced endothelial dysfunction by activating the Wnt/β-catenin signaling pathway》 作者:Panpan Zhang,Lingyue Hua,Huan Hou, Xingyue Du,Zhiqiang He, Menghan Liu, Xiaojuan Hu, Nianlong Yan 期刊:International Journal of Molecular Medicine 影響因子:2.928 PMID:30272329

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